Desde la celebración del I Congreso de DiabetesCERO (28-29) de Abril de 2017, y la concesión de la Ayuda a la Investigación en Junio del mismo año, se han realizado los siguientes progresos en el proyecto “Activación de LRH1 mediada por BL001 para promover la transdiferenciación de células alfa a células beta en un modelo de diabetes autoinmune”:
Primero, antes de pasar a pruebas con células y tejidos humanos, e individuos, comprobamos que BL001 estaba activando específicamente a la “diana” LRH-1 y no otros elementos que podrían causar efectos perjudiciales en el organismo. Tras suprimir/bloquear LRH-1, los efectos positivos de BL001 disminuyeron drásticamente, lo que significa que la acción de BL001 se produce a través de LRH-1. Además, los ratones tratados con BL001 no presentaron ningún efecto tóxico durante el tratamiento y su metabolismo no mostró ninguna alteración significativa. Esto significa que BL001 no está ejerciendo ninguna acción directa sobre otra molécula “diana” del organismo y el tratamiento no presenta efectos secundarios adversos.
También demostramos que es la activación específica de LRH1 (por BL001), y no de otro elemento, la que hace que los macrófagos M1 (que favorecen la inflamación y la destrucción de células y tejidos) vayan disminuyendo y aparezcan los macrófagos de tipo M2, que participan en procesos de reparación y regeneración del daño causado, en el entorno de los islotes pancreáticos y células beta.
Se han identificado qué conjuntos de genes se activan por BL001, para conocer y delimitar mejor su efecto. Mediante la técnica “Microarrays”, hemos observado que un tratamiento corto (2d) con BL001 activa conjuntos de genes implicados en procesos de tolerancia inmunológica y que favorecen el establecimiento de un ambiente/entorno anti-inflamatorio.
Una vez estudiada la acción de BL001 en modelos animales de Diabetes Tipo 1, comprobamos si la activación de LRH-1 por BL001 protege a los islotes humanos de la muerte celular y de un ataque inmunológico similar al que puede ocurrir en la DMT1. A cultivos de islotes humanos le añadimos citoquinas, que son moléculas que liberan los macrófagos y otras células del sistema inmune para provocar la muerte de otras células, y observamos que el tratamiento con BL001 protegió a los islotes humanos de la muerte celular provocada por citoquinas.
Para ver si BL001 también protegía a los islotes humanos de una acción destructiva más global del sistema inmune, estos islotes humanos se trasplantaron en ratones para provocar una respuesta inmune de “rechazo”. El tratamiento con BL001 a los receptores del trasplante hizo que los islotes trasplantados no fuesen destruidos por el ataque del sistema inmune durante los 9 días que duró el experimento. Estos resultados evidencian la capacidad protectora de la activación de LRH1 por BL001. Protección por un lado contra sustancias/moléculas que libera el sistema inmune para producir la muerte de las células, y por otro en condiciones donde se produce una respuesta o ataque del sistema inmune contra tejidos y células que se consideran extraños al organismo receptor.
Al mismo tiempo seguimos trabajando en la síntesis/fabricación de compuestos de nueva generación, que mejoren la eficacia y la potencia de BL001 en términos de afinidad por LRH-1 y protección de la célula beta. Así, un nuevo compuesto al que denominamos BL002, es capaz de activar LRH1 y proteger del daño inducido a los islotes pancreáticos a una dosis menor que la necesaria con BL001.
Actualmente, se ha puesto en marcha en colaboración con la UGC Endocrinología y Nutrición dirigida por el Dr. Manuel Aguilar Diosdado, en el Hospital “Puerta del Mar de Cádiz” un protocolo para la obtención de células mononucleares humanas de la sangre. Inicialmente se están obteniendo de donantes sanos y poniendo a punto la metodología para inducir la maduración de los macrófagos que serán tratados con BL001. Estudiaremos qué tipo de macrófagos obtenemos y después se compararán con los que se obtienen de la sangre de donantes con Diabetes Tipo 1 y si BL001 produce cambios sobre ellos.
Mediante un acuerdo de colaboración con la Universidad de Pisa recibiremos islotes humanos de donantes cadavéricos para marcar la población de células alfa de los mismos. Estos islotes también serán cultivados conjuntamente con macrófagos (co-cultivos) y tratados con BL001. Tras los tratamientos analizaremos el tipo de macrófagos presentes al final de los tratamientos y el porcentaje de células alfa que se ha convertido a células beta.
AUTOR/PONENTE:
BENOIT R. GAUTHIER/JOSE MANUEL MELLADO GIL
CENTRO ANDALUZ DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y MEDICINA REGENERATIVA (CABIMER
